The purpose of this work was to adapt the method for detection of genetic material of PCV-II developed by us for use in the field conditions in the absence of laboratory equipment and proper working conditions. To develop the technique, a liver sample from a pig was used, which was characterized as positive for the presence of PCV-II genetic material. Nucleic acid extraction was performed using an express method of our own modification. The isothermal amplification reaction was carried out using reagents manufactured by Thermo Fisher Scientific (Germany) and BioLabs (Great Britain) following the manufacturers’ recommendations when using the PCV-F3, PCV-B3, PCV-FIP, PCV-BIP primer systems. A WB-4MS water bath (Biosan, Latvia) and a 380 ml thermal mug (ZIZ, Ukraine) were used for isothermal amplification. Freeze dryer ALPHA 1-2 LD plus manufactured by Christ (Germany) was used for lyophilization of the reaction mixture. The reaction temperature was monitored using a ТТЖ-М thermometer (PJSC “Skloprylad”, Ukraine), the temperature was recorded using a SterilDisk logger (Tecnosoft, Italy). Gel Doc XR+ transilluminator (Bio-Rad, USA), SYBR Green I intercalating dye produced by Invitrogen (USA) and portable ultraviolet light source (YATO, Poland) were used to visualize and control the results of isothermal amplification. The previously developed isothermal amplification method was adapted for use in field conditions on the example of the identification of PCV-II. The developed method of isothermal amplification is technically simplified and does not require the use of special laboratory equipment
Keywords: DNA, PCR, thermal mug, UV flashlight
Opriessnig T., Karuppannan A. K., Castro A. M. M. G., Xiao C. T. Porcine circoviruses: current status, knowledge gaps and challenges. Virus Research. 2020. Vol. 286. P. 198044. DOI: https://doi.org/10.1016/j.virusres.2020.198044.
VanderWaal K., Deen J. Global trends in infectious diseases of swine. Proceedings of the National Academy of Sciences. 2018. Vol. 115, iss. 45. Р. 11495–11500. DOI: https://doi.org/10.1073/pnas.1806068115.
Герілович А. П. Експериментальне і теоретичне обґрунтування та розробка засобів епізоотологічного моніторингу, діагностики вірусних хвороб тварин та молекулярно-генетичного типування їх збудників (ортоміксо-, параміксо-, герпес-, цирко- та пестивірусна інфекції) : дис. … д-ра вет. наук. Харків : ННЦ «ІЕКВМ», 2011. 440 с. URL: https://nrat.ukrintei.ua/searchdoc/0511U000408.
Chae C. Postweaning multisystemic wasting syndrome: A review of aetiology, diagnosis and pathology. Veterinary Journal. 2004. Vol. 168, iss. 1. Р. 41–49. DOI: https://doi.org/10.1016/j.tvjl.2003.09.018.
Harding J. The clinical expression and emergence of porcine circovirus 2. Veterinary Microbiology. 2004. Vol. 98, iss. 2. Р. 131–135. DOI: https://doi.org/10.1016/j.vetmic.2003.10.013.
Segalés J., Allan G. M., Domingo M. Porcine circovirus diseases. Animal Health Research Reviews. 2005. Vol. 6, iss. 2. Р. 119–142. DOI: https://doi.org/10.1079/AHR2005106.
Герилович А. П., Стегний Б. Т. Разработка системы индикации и дифференциации цирковирусов свиней методом полимеразной цепной реакции. Молекулярная диагностика — 2007 : сб. тр. 6-й Всерос. науч.-практ. конф. (Москва, 28–30 ноября 2007 г.). Москва, 2007. Т. 2. С. 14–15.
Ситюк М. П., Музикіна Л. М., Галка І. В., Ничик С. А., Спиридонов В. Г., Мельничук С. Д. Розробка та валідація методики полімеразної ланцюгової реакції у режимі реального часу для детекції ДНК цирковірусу свиней другого типу. Ветеринарна біотехнологія : бюл. 2014. Вип. 25. С. 101–107. URL: http://nbuv.gov.ua/UJRN/vbtb_2014_25_31.
Allan G. M., Ellis J. A. Porcine circoviruses: a review. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation. 2000. Vol. 12, iss. 1. P. 3–14. DOI: https://doi.org/10.1177/104063870001200102.
Рудова Н. Г., Солодянкін О. С., Герілович А. П. Детекція генетичного матеріалу цирковірусу свиней ІІ типу методом петлевої ізотермальної ампліфікації (LAMP). Ветеринарна медицина : міжвід. темат. наук. зб. 2019. Вип. 105. С. 20–25. DOI: https://doi.org/10.36016/VM-2019-105-4.
Gerilovych A., Rekotchuk M., Konstantynovska O., Rudova N., Hrek I., Poteiko P., Solodiankin O. Development of the improved express method of DNA extraction. Fourth Annual BTRP Ukraine Regional One Health Research Symposium (Kyiv, Ukraine, 20–24 May 2019) : abstr. Kyiv, 2019. P. 414.
Boom R., Sol C. J., Salimans M. M., Jansen C. L., Wertheim-van Dillen P. M., van der Noordaa J. Rapid and simple method for purification of nucleic acids. Journal of Clinical Microbiology. 1990. Vol. 28, iss. 3. Р. 495–503. DOI: https://doi.org/10.1128/jcm.28.3.495-503.1990.
